奶牛结核病快速诊断技术研究
- 主要完成单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 主要完成人员:刘思国
- 起 止 时 间 :2002年6月—2004年6月
- 获 奖 情 况 :2005年中国农业科学院科学技术成果二等奖
- 内 容 提 要 :
牛结核病是一种重要的人畜共患病,它严重危害畜牧业的持续发展和人类的身心健康。加强牛结核病快速、特异检测方法的研究,对于有效控制和消灭牛结核病具有重要的现实意义。针对牛分枝杆菌培养时间长和鉴别困难的缺点,本研究成果解决了牛分枝杆病的快速检测和结核分枝杆菌菌型快速鉴别的问题。
本研究建立了以esat-6为目的基因的PCR方法。esat-6基因是只存在于结核分枝杆菌复合物中特异性的免疫原基因,而且在卡介苗(BCG)和其他分枝杆菌中是缺失的,因此本研究建立了以esat-6基因作为目的基因的PCR检测方法,该方法不仅可以特异性检测牛结核病病原体,而且可以检测接种卡介苗的人或其他动物。具有区别BCG免疫和结核分枝杆菌复合物感染的特点。
针对牛(牛型)分枝杆菌与结核分枝杆菌(人型)鉴别困难的缺点,本研究还建立了特异性鉴别牛(牛型)分枝杆菌与结核分枝杆菌(人型)的方法。pncA(吡嗪酰胺酶)基因编码吡嗪酰胺酶,基因序列分析表明,牛分枝杆菌和结核分枝杆菌pncA(吡嗪酰胺酶)基因存在着差异,而这种差异导致了对吡嗪酰胺药物的敏感性不同,结核分枝杆菌对吡嗪酰胺敏感,牛分枝杆菌对吡嗪酰胺具有抗性。因此,可以根据这种差异设计引物,通过引物与DNA模板结合力的不同及高的退火温度的控制,特异性鉴定牛分枝杆菌和结核分枝杆菌。
本项目属应用研究,在牛结核病的快速检测和牛型与人型结核杆菌的菌型快速鉴定技术方面取得了突破性进展,具有创新性,为我国牛结核病的快速检测提供了良好的技术支持,填补了我国在牛奶结核病快速检测方面的空白,具有很好的产业化开发前景和应用价值。