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鸡贫血病毒感染性全基因克降的构建

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  • 主要完成单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
  • 主要完成人员:陈奖励,辛九庆,周方红,宋秀龙,卢景良
  • 起  止  时  间 :1996年1月—1998年12月
  • 获  奖  情  况 :1999年中国农业科学院科技进步奖一等奖
  • 内  容  提  要 :
  

该项研究利用我国分离和鉴定的山东分离株CAV-SJ1,应用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增, 将扩增的1.5kb和0.8kb DNA片段重组至pQE32质粒,使之首尾连接2.3kb的全病毒DNA,得到C AV-SJ1株全基因克隆。将克隆进一步测定序列,并与国外标准毒株TK5803、26P4、Cux-1、8 2-2分析比较,结果表明分别有31、41、40、51个碱基差异,但与澳大利亚株相差较大,在O RF3中就有73个碱基不同。将CAV-PQE32阳性克隆转染MDCC-MSB1细胞,用荧光抗体和ELISA方 法检测,证明有CAV病毒粒子产生,说明转染成功,获得了CAV-SJ1株的感染性全基因克隆。 在大肠杆菌中成功地表达了VP2蛋白。构建了VP3的表达质粒,细胞转染证明其能明显诱导人喉癌细胞和白血病癌细胞的凋亡。
  CAV全长基因的克隆;CAV-PQE32阳性克隆转染MDCC-MSB1细胞。VP2蛋白的原核表达、VP3表 达质粒的构建及其诱导人的肿瘤细胞凋亡。采用对CAV-DNA分段PCR扩增、克隆,然后拼接成 完 整的病毒DNA的技术路线,克隆效率高、快捷;CAV-SJ1的感染性全基因克隆为进一步进行CA V的分子生物学研究,研制基因工程疫苗、生产重组抗原等奠定了基础。本研究成功地在大 肠杆菌中表达了VP2蛋白,并首次证明VP3蛋白能诱导人喉癌细胞和白血病癌细胞的凋亡,显 示了较好的应用前景,具有重要的理论和实际意义。本研究获得了鸡贫血病毒国内野毒株CA V-SJ1的感染性全基因克隆,这在国内为首次报道;同时VP3基因诱导喉癌细胞Hep-2和白血病癌细胞HL-60的凋亡在国外尚未见报道,填补了国际同类研究的空白,该项研究达到了国 际同类研究的先进水平。
  本研究获得CAV-SJ1感染性分子克隆将在基因工程载体、基因工程疫苗、重组抗原生产以及 抗肿瘤等研究方面发挥重要作用。VP1、VP2基因将用于生产CAV诊断抗原和基因工程疫苗;V P3基因可诱导人的肿瘤细胞的凋亡,为开发VP3抗癌制剂提供了物质基础。

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